Jurnal Internasional Racun, Vol. 11, Halaman 336: Pemurnian Cepat Racun RTX Bebas-Endotoksin

Download Jurnal Disini

Racun, Vol. 11, Halaman 336: Pemurnian Cepat Racun RTX Bebas-Endotoksin

Racun doi: 10.3390 / toxins11060336

Penulis:
Ondrej Stanek
Jiri Masin
Radim Osicka
David Jurnecka
Adriana Osickova
Peter Sebo

Leukotoksin sitolitik dari kelompok repeat in toxin (RTX) adalah protein besar yang diekskresikan oleh bakteri patogen gram negatif melalui sistem sekresi tipe 1 (T1SS). Karena hasil rendah dan stabilitas yang buruk dalam kultur patogen asli, berguna untuk memurnikan sitolysin RTX yang terasilasi lemak rekombinan dari badan inklusi yang diproduksi di E. coli. Namun, preparat semacam itu biasanya terkontaminasi oleh sejumlah besar E. coli lipopolysaccharide (LPS atau endotoksin). Kami melaporkan prosedur sederhana untuk pemurnian sejumlah besar racun RTX yang aktif secara biologis dan bebas endotoksin. Ini didasarkan pada fitur umum dari sitopisin RTX yang diekskresikan T1SS sebagai polipeptida yang tidak dilipat dan dilipat menjadi racun yang aktif secara biologis hanya dengan pengikatan ion kalsium di luar sel bakteri. Meniru proses ini, protein RTX dilarutkan dari badan inklusi dengan buffer 8 M urea, diikat ke media kromatografi yang sesuai dalam kondisi denaturasi dan LPS yang terkontaminasi dihilangkan melalui pencucian kolom yang luas dengan buffer yang mengandung 6 hingga 8 M urea dan 1% Triton X-100 atau Triton X-114. Pembilasan dengan kolom ekstensif dengan buffer 8 urea menghilangkan deterjen residu dan preparasi protein RTX yang sangat aktif kemudian hanya mengandung sejumlah kecil LPS. Prosedur ini dicontohkan menggunakan empat cytolysins RTX prototypic, Bordetella pertussis CyaA dan hemolysins dari Escherichia coli (HlyA), Kingella kingae (RtxA), dan Actinobacillus pleuropneumoniae (ApxIA).

Download Jurnal Disini
Jurnal

Racun, Vol. 11, Halaman 336: Pemurnian Cepat Racun RTX Bebas-Endotoksin