Jurnal Internasional Gen, Vol. 10, Halaman 39: Penargetan Gen Mediasi TALEN untuk Terapi Cystic Fibrosis-Gene

Download Jurnal Disini

Gen, Vol. 10, Halaman 39: Penargetan Gen Mediasi TALEN untuk Terapi Cystic Fibrosis-Gene

Gen doi: 10.3390 / genes10010039

Penulis:
Emily Xia
Yiqian Zhang
Huibi Cao
Jun Li
Rongqi Duan
Jim Hu

Cystic fibrosis (CF) adalah kelainan monogenik yang diturunkan, sesuai dengan terapi berbasis gen. Karena penyakit paru-paru CF saat ini merupakan penyebab utama mortalitas dan morbiditas, dan jalan napas paru-paru mudah diakses oleh pengiriman gen, upaya terapi gen CF utama saat ini diarahkan ke paru-paru. Meskipun sel-sel epitel saluran napas diperbarui secara perlahan, koreksi gen permanen melalui pengeditan atau penargetan gen dalam sel-sel induk jalan napas diperlukan untuk melanggengkan efek terapeutik. Nuclease efektor seperti aktivator transkripsi (TALEN) telah digunakan secara luas untuk berbagai aplikasi pengeditan gen. Persyaratan ketat untuk situs target yang mengikat nuclease memungkinkan untuk mengedit gen dengan presisi. Dalam studi ini, kami merekayasa vektor adenoviral (HD-Ad) yang bergantung pada helper untuk memberikan sepasang TALEN bersama dengan DNA donor yang menargetkan lokus AAVS1 manusia. Dengan lengan homologi yang panjangnya 4 kb, kami mendemonstrasikan penyisipan yang tepat dari gen reporter LacZ atau manusia cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) minigene (cDNA) ke dalam situs target. Dengan menggunakan reporter LacZ, kami menentukan efisiensi integrasi gen menjadi sekitar 5%. Dalam sel transduksi vektor CFTR, kami dapat mendeteksi ekspresi mRNA CFTR menggunakan qPCR dan koreksi fungsi menggunakan pembaca plat gambar fluorometrik (FLIPR) dan uji efluks iodida. Secara keseluruhan, temuan ini menunjukkan arah baru untuk penelitian in vitro dan in vivo di masa depan dalam pengeditan gen CF.

Download Jurnal Disini
Jurnal

Gen, Vol. 10, Halaman 39: Penargetan Gen Mediasi TALEN untuk Terapi Cystic Fibrosis-Gene